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    層析技術概念、原理、分類(凝膠層析和離子交換層析)

    發布時間:2015-07-02   點擊次數:4354次

    一、概念

    利用混和物中各組分理化性質(吸附力、分子形狀、大小、分子極性、分子親和力以及分配系數)的差異,在物質經過兩相中進行分離的一種技術。

    本世紀初(1903年),俄國植物學家M.C.Jber發現并使用這一技術證明了植物的葉子中不僅有葉綠素,還含有其他色素,實際上他使用的吸附層析?,F在層系法已成為生化、分子生物學及其它學科領域有效的分離、分析工具之一。

    二、原理


    具體過程:

    可分離物質:糖類、有機酸、氨基酸、核苷酸。


    三、分類

    1.  按兩相所處物理狀態分類

    氣相層析:氣液層析(固定相為液體)和氣固層析(固定相為固體),流動相為氣體。

    液相層析:液液層析(固定相為液體)和液固層析(固定相為固體),流動相為液體。

    2.  按層析方式分類

    柱層析:固定相裝于柱內,使樣品沿著一個方向移動而分離。

    薄層層析:將適當粘度的固定相均勻鋪在薄板上,點樣后,用流動相展開。

    紙層析:用濾紙作液體的載體,點樣后用流動相展開。

    3.  根據層析原理分類:常用分類法

    (1)吸附層析:固定相是固體吸附劑,通過對不同溶質吸附力強弱不同進行分離。

    (2)分配層析:利用兩相中的分配系數不同。

    分配系數:當一種溶質在兩種給定的互不相溶的溶劑中分配時,在一定溫度下達到平衡后,溶質在兩相中的濃度比值為一常數,即分配系數(Kd)

    Kd=Ca / Cb

    Ca和Cb分別代表某一物質在互不相溶的兩相,A相(動相)和B相(靜相)中的濃度。

    (3)離子交換層析:固定相是離子交換劑,各組分與其親和力不同

    (4)凝膠層析:固定相是多孔凝膠,根據流動相中溶質的分子量大小差異進行分離

    (5)親和層析:利用固定相載體表面偶聯具有特殊親和作用的配基,與溶質分子發生可逆的特異性結合進行分離

    (6)金屬螯合層析

    (7)疏水層析

    (8)反相層析

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